人白介素8(IL-8CXCL8)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)

　　BS-1551  人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒

　　一、產(chǎn)品信息

　　產(chǎn)品名稱?：人白介素8(IL-8/CXCL8)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

　　規(guī)格?：96孔板/48孔板(可選)

　　檢測(cè)方法?：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

　　檢測(cè)范圍?：7.81-500 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說(shuō)明為準(zhǔn))

　　靈敏度?：≤4.69 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說(shuō)明為準(zhǔn))

　　樣本類型?：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液等生物樣本

　　保質(zhì)期?：6個(gè)月(2-8℃避光保存，具體以產(chǎn)品標(biāo)簽為準(zhǔn))

　　用途?：僅供科研使用，不可用于臨床診斷或治療

　　二、檢測(cè)原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。預(yù)先包被在酶標(biāo)板孔中的抗人IL-8/CXCL8單克隆抗體捕獲樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的目標(biāo)抗原。加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體后，形成“包被抗體-抗原-檢測(cè)抗體”復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，通過(guò)特異性結(jié)合完成信號(hào)放大。洗滌去除未結(jié)合成分后，加入TMB顯色底物。辣根過(guò)氧化物酶催化底物反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液后變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣本中IL-8/CXCL8的濃度成正比，通過(guò)酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

　　三、試劑盒組成

　　預(yù)包被抗體酶標(biāo)板?：96孔或48孔，含抗人IL-8/CXCL8單克隆抗體

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉，復(fù)溶后形成系列濃度梯度

　　樣本稀釋液?：用于稀釋樣本和標(biāo)準(zhǔn)品

　　生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體?：與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合

　　生物素標(biāo)記抗體稀釋液?：用于稀釋生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體

　　辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素?：信號(hào)放大試劑

　　酶結(jié)合物稀釋液?：用于稀釋辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素

　　濃縮洗滌液?：20×濃縮液，需用去離子水稀釋

　　顯色底物(TMB)?：避光保存

　　終止液?：含稀硫酸，具輕微腐蝕性

　　封板膜?：用于溫育時(shí)密封酶標(biāo)板

　　說(shuō)明書(shū)?：詳細(xì)操作指南

　　四、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

　　1. 樣本收集與處理

　　血清樣本?：全血室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，2000rpm離心20分鐘，取上清。4℃保存1周內(nèi)檢測(cè)，長(zhǎng)期保存需分裝凍存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

　　血漿樣本?：使用EDTA或肝素抗凝，處理方法同血清。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：2000rpm離心20分鐘去除細(xì)胞碎片，取上清檢測(cè)。

　　樣本稀釋?：若樣本濃度超出檢測(cè)范圍，需用樣本稀釋液稀釋后重新檢測(cè)。

　　2. 試劑準(zhǔn)備

　　濃縮洗滌液?：用去離子水按1:20比例稀釋，室溫平衡后使用。

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：按說(shuō)明書(shū)要求用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，輕柔混勻避免氣泡，形成系列濃度梯度。

　　生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體?：使用前用生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。

　　辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素?：使用前用酶結(jié)合物稀釋液稀釋。

　　3. 自備器材

　　酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng))

　　微量移液器及吸頭

　　洗板機(jī)或洗瓶

　　37℃恒溫箱或水浴鍋

　　去離子水

　　五、操作步驟

　　加樣?：從平衡至室溫的鋁箔袋中取出所需板條，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔加入系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔加入待測(cè)樣本50μL，空白孔不加。

　　溫育?：除空白孔外，每孔加入100μL稀釋后的生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體，封板膜封住反應(yīng)孔，37℃溫育60分鐘。

　　洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1分鐘后甩去，重復(fù)洗滌3-5次，拍干。

　　加酶標(biāo)物?：每孔加入100μL稀釋后的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素，封板膜封住，37℃溫育30分鐘。

　　洗滌?：同步驟3。

　　顯色?：每孔加入90μL顯色底物(TMB)，37℃避光顯色15-30分鐘。

　　終止?：每孔加入50μL終止液，終止反應(yīng)(藍(lán)色變?yōu)辄S色)。

　　檢測(cè)?：30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值(OD值)。

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算樣本濃度。若樣本經(jīng)稀釋，結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)。

　　七、注意事項(xiàng)

　　試劑平衡?：所有試劑和樣本使用前需平衡至室溫(20-25℃)，避免溫度差異影響結(jié)果。

　　試劑保存?：未使用試劑需及時(shí)放回2-8℃保存，避免反復(fù)凍融濃縮洗滌液。

　　操作規(guī)范?：

　　避免試劑和樣本交叉污染。

　　洗板時(shí)確?？變?nèi)液體被充分吸干，但避免過(guò)度干燥。

　　顯色底物需避光保存，使用前應(yīng)為無(wú)色或淺色。

　　終止液具腐蝕性，避免接觸皮膚和衣物。

　　質(zhì)量控制?：

　　每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白孔和標(biāo)準(zhǔn)品孔。

　　板內(nèi)、板間變異系數(shù)應(yīng)小于10%。

　　回收率應(yīng)在80%-120%之間。

　　樣本處理?：所有樣本視為潛在傳染源，操作時(shí)需佩戴防護(hù)裝備，廢棄物按生物安全規(guī)范處理。

　　八、產(chǎn)品性能

　　靈敏度?：≤4.69 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說(shuō)明為準(zhǔn))。

　　特異性?：與IL-8類似物無(wú)交叉反應(yīng)。

　　精密度?：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

　　回收率?：80%-120%。

　　線性范圍?：7.81-500 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說(shuō)明為準(zhǔn))。

　　注：以上僅供參考，本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。

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