小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒實驗說明書

　　BS-2260小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，通過特異性抗體捕獲小鼠血清/血漿中的ALT，結(jié)合酶標(biāo)二抗顯色反應(yīng)，通過吸光度值定量檢測ALT活性。檢測范圍4.687-300U/L，靈敏度達1.17U/L 。

　　二、試劑組成

　　預(yù)包被微孔板：ALT抗體包被(96孔/板)

　　標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶(0-100U/mL梯度濃度)

　　酶標(biāo)二抗：HRP標(biāo)記抗體(6mL)

　　底物液：TMB顯色液(A/B各6mL)

　　終止液：2Mliusuan(6mL)

　　濃縮洗滌液：20×Tween-20緩沖液(20mL)

　　三、操作步驟

　　1. 樣本準(zhǔn)備

　　采集小鼠全血至無內(nèi)毒素試管，離心(3000rpm,10min)分離血清/血漿。

　　避免溶血、脂血樣本，短期保存(2-8℃≤48h)，長期需-80℃凍存(避免反復(fù)凍融)。

　　2. 檢測流程

　　步驟操作溫度/時間

　　1、標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL加至對應(yīng)孔室溫

　　2、加入酶標(biāo)二抗50μL，封板避光孵育37℃, 60min

　　3、洗滌液洗板3次(每次浸泡1min)-

　　4、加入底物液A/B各50μL37℃避光, 15min

　　5、加入終止液50μL，立即測450nm吸光度-

　　四、注意事項

　　試劑保存：未開封試劑2-8℃避光保存(有效期6個月)，開封后R1/R2需28天內(nèi)用完。

　　操作規(guī)范：

　　移液器吸頭不可混用，避免交叉污染。

　　安全防護：處理樣本時需戴手套，廢棄物按生物危害物處理。

　　五、結(jié)果計算

　　繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(濃度-OD值)，擬合線性方程。

　　樣本ALT活性(U/L)=(樣本OD值-空白OD值)/標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。

　　六、常見問題

　　高背景值：可能因洗滌不凈或底物曝光時間過長。

　　線性不佳：檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度或孵育溫度一致性。

　　注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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